Thiết kế T-vector pTUAF dùng trong tách dòng phân tử

Mặc dù sản phẩm PCR có thể được sử dụng trực tiếp trong nhiều ứng dụng nhưng trong một số trường hợp việc tạo dòng đoạn DNA đích mang lại những ưu việt nhất định. Hầu hết sản phẩm PCR sử dụng taq DNA polymerase đều chứa một nucleotide Adenine nhô ra ở hai đầu 3^’-OH bởi hoạt tính terminal transferase của enzyme này (Clark 1988) . Do đó sản phẩm PCR có thể được tách dòng trực tiếp bằng cách đưa vào vector có 1 nucleotide đơn Thymidine (Adachi and Fukuhara) ở hai đầu 3’-OH mà không cần qua các bước xử lý sản phẩm sau PCR. Phương pháp này được gọi là tách dòng TA và vector sử dụng trong phản ứng TA được gọi là T-vector. Đây là giải pháp thuận lợi, tiết kiệm thời gian, công sức.

T-vector có thể được tạo ra bằng một số phương pháp khác nhau (Mead, Pey et al. 1991, Ido and Hayami 1997, Arashi-Heese, Miwa et al. 1999). Trong số các phương pháp này, phương pháp tạo đầu treo Thymine bằng cách cắt với enzyme XcmI có ưu điểm dễ thực hiện và mang lại hiểu quả tách dòng cao (Jo and Jo 2001). Trong điều kiện của Việt Nam hiện nay, việc đặt hàng T-vector từ các công ty nước ngoài có những bất lợi về thời gian (3-4 tuần) và chất lượng ít nhiều bị ảnh hưởng trong quá trình vận chuyển dẫn tới hiệu suất tách dòng đôi khi không ổn định (dữ liệu cá nhân). Vì vậy, yêu cầu đặt ra là cần chủ động nguồn T-vector trong phòng thí nghiệm.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thiết kế đoạn adaptor dài 36 bp có chứa hai vị trí cắt của XcmI và có 2 đầu treo là trình tự của BamHI và EcoRI (hình 1). Adaptor được gắn xen vào vị trí đa nối (MCS) của pTZ57R/T. Sau đó, vector tái tổ hợp được cắt bằng XcmI tạo ra T-vector pTUAF. Tên gọi này được đặt theo tên tiếng Anh của Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Thainguyen University of Agriculture and Forestry), trong đó, kí hiệu đầu tiên (p) là kí hiệu của plasmid theo quy chuẩn quốc tế; chữ T trong cụm TUAF vừa có ý nghĩa là T-vector vừa trùng với chữ cái đầu tiêu trong cụm từ viết tắt của Trường.

Download toàn văn bài báo tại đây

Tin bài: Dương Văn Cường

Đăng bài: Bùi Đình Lãm